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本试剂盒基于LAMP-HNB变色扩增技术，为冻干制品相对于市面上的液体型产品更加稳定，灵敏度更高，操作更加方便，通常在30分钟内完成检测。试剂盒含Bst4.0 DNA聚合酶，既可以扩增DNA，也可以直接扩增RNA分子。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。LAMP检测方法分为多种，包括染料法、浊度法、电泳法及的TaqMan荧光探针法。

Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有很强的链置换活性，以及5'→3'的DNA聚合酶活性，因此可以应用于LAMP检测实验。

羟基萘酚蓝（HNB）是一种金属离子指示剂，HNB与镁离子结合使得反应体系初始颜色为紫罗兰色，随着反应的进行，Mg²⁺与析出的焦磷酸根离子反应生成焦磷酸镁沉淀，羟基萘酚蓝失去了镁离子使得体系颜色变为天蓝色，而未反应的体系则仍保持着紫罗兰色。

• LAMP HNB Reagent为干粉形式，包含Bst4.0 DNA聚合酶、dNTP、HNB显色剂等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.75mL的LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
  
• 按下表加入各成分配置LAMP反应混合液
  

  成分	用量
  溶解后的LAMP HNB Reagent	15μL
  LAMP Primer Mix	1μL、1.5μL或2μL
  模板DNA或RNA	1μL
  ddH2O	至20μL

  • 首次实验时LAMP Primer Mix分别采用1、1.5、2μL，以阴性不变色，阳性样品正常变色为标准，作为后续测试用量。
• 反应体系配好后，置于60～65℃（首次实验采用60℃）进行反应20～45min。
  
  • 扩增良好的引物组合，通常25min即可变色，一般不超过45min，首次实验设置20、25、30、45min。
    
  • 在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染）。一旦发生气溶胶污染，请使用DNA气溶胶污染去除剂（货号：MT3001）进行环境清理。

• LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为8μM、F3/B3分别为2μM。
  
• 四个重要的参数，将对成功建立LAMP检测方法至关重要，分别是：引物位置；引物使用浓度；反应温度；反应时间。引物使用浓度、反应温度、反应时间是优先要确认的参数，如经过参数调整后仍不能达到检测用标准，则重新设计引物组合，再进行测试。